Kõrgefektiivne vedelikkromatograafia hõlmab peamiselt süstimissüsteemi, infusioonisüsteemi, eraldussüsteemi, tuvastamissüsteemi ja andmetöötlussüsteemi. Järgnevalt tutvustatakse nende vastavaid koostisi ja omadusi.
1. Sissepritsesüsteem kasutab süstimise lõpuleviimiseks tavaliselt membraanpihustit või kõrgsurve sissepritsekambrit konstantse sissepritsemahuga. See on kasulik proovianalüüsi reprodutseeritavuse parandamiseks.
2. Infusioonisüsteem koosneb kolmest osast: kõrgsurvepumbast, liikuva faasi reservuaarist ja gradiendimõõtjast. Kõrgsurvepumba üldrõhk on l. 47-4.4X107Pa, reguleeritav ja stabiilne voolukiirus. Kui kõrgsurve liikuv faas läbib kromatograafilist kolonni, võib see vähendada kolonnis oleva proovi difusiooniefekti, kiirendada liikumiskiirust kolonnis, parandada eraldusastet ja taastada proovi. Kasulik proovi bioloogilise aktiivsuse säilitamiseks. Mobiilse faasi salvestusvea ja gradiendi analüsaator võib muuta liikuvat faasi vastavalt statsionaarse faasi ja proovi omadustele, sealhulgas muuta eluendi polaarsust, ioonitugevust ja pH väärtust või kasutada konkureerivaid inhibiitoreid või denatureerivaid aineid. See võimaldab tõhusalt eraldada mitut ainet, isegi kui on ainult üks erinevuste või isomeeride komplekt.
3. Eraldussüsteem sisaldab kromatograafiakolonne, ühendustorusid, termostaate jne. Kromatograafiakolonni pikkus on üldjuhul 10-50cm (kui on vaja kahte, võib nende vahele lisada ühendustoru), mille siseläbimõõt 2-5mm, valmistatud kvaliteetsest roostevabast terasest või paksuseinalisest klaastorust või titaanisulamist. Seal on fikseeritud faas osakeste suurusega 5-10 μm (koosneb maatriksist ja fiksaatorist). Statsionaarses faasis olev maatriks on valmistatud suure mehaanilise tugevusega vaigust või silikageelist, millel on inertsus (nt aluseline silikageel on eemaldatud), poorsus (poori suurus kuni 1000?) ja suur eripind. Need on sidestamiseks mehaaniliselt kaetud (sarnaselt gaasikromatograafia statsionaarsete faaside valmistamisega) või keemiliselt sidestatud erinevate geenidega (nagu fosfaat, kvaternaarne amino, hüdroksümetüül, fenüül, amino või erineva pikkusega süsinikahela alküül) või ligandi orgaaniliste ühenditega. . Seega on sellel fikseeritud suhtelisel struktuuril hea selektiivsus. Näiteks pärast herneaglutiniini (PSA) sidumist poorse silikageeli pinnal saab eraldada fibroblastides olevad glükoproteiinid. Lisaks on statsionaarsel faasil põhinev plasmiid väike ja kolonnipõhjal on lihtne saavutada ühtlane ja tihe olek. Pöörisvoolu difusiooniefekti on lihtne vähendada. Maatriksi osakeste suurus on väike, mikropoorid on madalad ja proovi massiülekanne mikropoorses piirkonnas on lühike. Need on kasulikud ribalaiuse vähendamiseks ja eraldusvõime parandamiseks. Kolonniefekti teooria analüüsi kohaselt on seda väiksem maatriksi osakeste suurus ja suurem plaadi teoreetiline arv N. See tõestab veelgi, et mida väiksem on maatriksi osakeste suurus, seda suurem on eraldusaste. Lisaks saavad kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia termostaadid reguleerida temperatuuri toatemperatuurilt 60 kraadini, lühendades analüüsiaega, suurendades massiülekande kiirust. See võib parandada kromatograafilise kolonni efektiivsust.
4. HPLC-tuvastussüsteemides tavaliselt kasutatavad detektorid hõlmavad ultraviolettdetektoreid, murdumisnäitaja detektoreid ja fluorestsentsdetektoreid.
(1) UV-detektor sobib absorptsiooniomadustega proovide tuvastamiseks ultraviolettvalguses (või nähtavas valguses). Selle omadused: lai kasutusala (nagu valgud, nukleiinhapped, aminohapped, nukleotiidid, peptiidid, hormoonid jne); Kõrge tundlikkus (tuvastuspiir 10-10g/ml); Lai lineaarne ulatus; Ei ole tundlik temperatuuri ja voolukiiruse muutuste suhtes; Suudab tuvastada gradientlahustega elueeritud proove.
(2) Diferentsiaalse murdumisnäitaja detektorit saab kasutada kõigi proovikomponentide tuvastamiseks, mille murdumisnäitajad erinevad mobiilfaasidetektori poolt tuvastatutest. Praegu tuvastatakse selle tuvastamissüsteemi abil enamik süsivesikute ühendeid. Süsteemil on tugev universaalsus ja lihtne toimimine, kuid madal tundlikkus (tuvastuspiir 10-7g/ml) ja muutused liikuvas faasis võivad põhjustada muutusi murdumisnäitajas. Seetõttu ei sobi see jälgede analüüsiks ega gradientelueerimise proovide tuvastamiseks.
(3) Fluorestsentsdetektor sobib ainult fluorestseeruvate orgaaniliste ühendite (nagu polütsüklilised aromaatsed süsivesinikud, aminohapped, amiinid, vitamiinid ja teatud valgud) määramiseks teatud tingimustel, lähtudes fluorestsentsi intensiivsusest ja kiiratava valguse kontsentratsioonist. Selle tundlikkus on väga kõrge (tuvastuspiir on 10-12~10-14 g/ml) ning seda saab kasutada jälgede analüüsiks ja tuvastamiseks gradientelueerimisel.
5. Andmetöötlussüsteem suudab proovide eraldamiseks koguda, salvestada, kuvada, printida ja töödelda katseandmeid ning teha korrektselt ettevalmistus- või identifitseerimistööd